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shRNA表達克隆
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工程商
產(chǎn)品時間:
2020-11-09
OmicsLink™ shRNA表達克隆是將針對靶基因設計shRNA(小發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNAi)靶點序列,然后將其裝于表達載體中,我公司現(xiàn)可提供4套表達載體,可用于對人、小鼠、大鼠以及其他物種的全基因組范圍的基因表達抑制研究。
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OmicsLink™ shRNA表達克隆的特性
所有shRNA靶點序列的選取均經(jīng)過準確算法計算。根據(jù)基因的不同, shRNA其莖的長度在19到29堿基對之間。這些保證shRNA克隆表達后有很高的表達抑制效率和zui低的脫靶效應(off target effect)。
克隆shRNA 所采用的載體有慢病毒載體和以哺乳動物細胞為宿主的載體,各類載體擁有不同的啟動子和跟蹤標記基因可供選擇。
載體中所帶有的綠色熒光跟蹤標記基因( eGFP )可以用于監(jiān)測質(zhì)粒載體的轉(zhuǎn)染效率和轉(zhuǎn)導病毒的感染效率。
載體結(jié)構(gòu)上帶有穩(wěn)定細胞株的篩選標記(嘌呤霉素)和綠色熒光跟蹤標記基因(EGFP ),這些特性使得該載體既能用于穩(wěn)定抑制效應的研究,也可用于瞬時抑制效應的研究。
使用慢病毒載體系統(tǒng),可轉(zhuǎn)導shRNA進入常規(guī)的分裂細胞,以及不分裂而難以轉(zhuǎn)染的目的細胞株。
載體的各部分序列已經(jīng)過測序,包括啟動子、編碼shRNA的正義和反義鏈、發(fā)夾結(jié)構(gòu)、終止子和其他接頭序列。
OmicsLink™ 的應用
基因表達下調(diào) shRNA克隆對單個基因的基因表達抑制效應可以通過和一個包含不規(guī)則序列的陰性對照克隆來比較研究。
信號通路研究 我公司的人類基因ORF克隆按照不同的信號傳導、代謝、疾病通路和相關性、基因家族等進行了分類。將已知同一通路的shRNA克隆以96孔或384孔板的形式排列在一起,可一次研究一組基因在某一信號通路中的功能。目前我公司已可提供針對人類全部激酶基因的shRNA克隆,并已按照按不同激酶的功能進行了分類。
ORF表達克隆確證 我公司已有shRNA相應人類靶基因的ORF克隆,可裝在各種表達載體中,帶有不同的標簽和跟蹤標記基因。這些正常的ORF表達克隆和在shRNA靶序列帶有沉默突變的同樣的ORF表達克隆,可以用于shRNA確認研究和基因功能拯救研究。
產(chǎn)品保證
的表達框已經(jīng)全長測序,包括啟動子、正義和反義靶序列、發(fā)夾結(jié)構(gòu)、終止信號及其他接頭序列。 對于構(gòu)建到psi-sH1載體中的人類激酶組shRNA克隆,我們每個基因提供1~3個克隆,所有克隆均已通過AP色度法確證其對靶基因的表達抑制水平達到70%以上。對于構(gòu)建到慢病毒和哺乳動物載體的shRNA克隆,我們每個基因提供4個克隆。我們保證至少有1個克隆達到在mRNA水平對靶基因的表達抑制水平達到70%以上,前提是用前面所提的檢測方法,并嚴格按照說明書所提供的操作流程和注意事項進行實驗。如果經(jīng)過我公司核實,的確4個中沒有1個有所期望的表達抑制水平的話,我公司承諾免費更換1-4個shRNA克隆。
* 本產(chǎn)品僅供研究、不用于臨床診斷
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